酵母菌株轉化及篩選


畢赤酵母表達菌株轉化及篩選

目標基因合成:

1.   從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。若本公司的cDNA文庫中有這個基因,免費提供給客戶。

2.   根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子優化。

3.   合成基因序列。

提供給客戶:目標基因(在T載體或常規穿梭載體上)及測序報告。

價格:3.0/堿基,如果客戶直接提供構建好的質粒,則免去這部分費用。

時間:2-3周,根據基因的大小而定。

目標基因亞克隆

1.   擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。

2.   將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。

3.   測序驗證構建質粒的準確性。 

4.   提供如下表達載體:

Expression Vector

Promotor

Signal peptide

pPICZα A

AOX

α-factor

pPIC9K

AOX

α-factor

pPIC3.5K,pPICZA,pAO815

AOX

None

提供給客戶:正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。

價格:1000.00/亞克隆。

時間:1-2周。

Pichia Pastoris表達菌株轉化及篩選

1.   我公司擁有BioRad Gene Pulser Xcell電轉儀及成熟的畢赤酵母轉化篩選操作平臺。克隆轉化率可高達50/μg質粒以上,陽性克隆率90%以上,上清中目標蛋白表達量達100mg/L以上,目標蛋白占總上清中總蛋白量50%以上,便于后期純化。

2.   如已有構建好的表達載體,可省去基因合成及亞克隆步驟。擴增并抽提構建好的表達質粒。

3.   將表達質粒轉化到高效的Pichia.pastoris表達菌株中。

4.   至少挑選5個陽性克隆擴增并誘導表達目標蛋白。

5.   SDS-PAGE電泳檢測培養物中目標蛋白的表達情況。

6.   可提供表達菌株:X33,KM71H,GS115,KM71,SMD1168

提供給客戶:重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。

價格:1000.00/ 質粒。

時間:2周。


1.畢赤酵母克隆上清中目標蛋白的表達


2. BioRad Gene Pulser Xcell電轉儀

 


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