原核表達與純化

原核表達與純化服務

服務描述:

大腸桿菌表達系統是目前最常用,也是最經濟實惠的蛋白表達系統,與其他表達系統相比具有遺傳背景清楚,目的基因表達水平高,培養周期短,抗污染能力強等特點,是分子生物學研究和生物技術產業化發展進程中的重要工具。本公司的大腸桿菌表達平臺可為您提供全方位的重組蛋白生產服務,在表達包括可溶性蛋白、包涵體、融合蛋白等方面,擁有豐富的經驗和專業技術,能解決蛋白表達過程中的各種瓶頸問題。

眾紅優勢:

HisGSTMBPStrepFLAG等標簽多種表達方式同時進行,確保獲得最優質的蛋白。

保證蛋白為普通緩沖可溶。

純化的蛋白經過ELISAWestern-blot,或者其它生物活性驗證。

可提供詳細的表達純化條件,實驗數據以及菌株。

該服務根據客戶構建好的表達載體,并參考客戶提供的實驗方案,如溫度、IPTG誘導濃度及表達時間,選擇合適的E.coli菌株進行目的蛋白誘導表達并純化。如果客戶還沒有構建好表達載體,我們也可以幫您將目的基因插入到特定的表達載體中,并摸索蛋白表達的最優條件。各項服務需額外加付少許費用。表達出的目的蛋白進行SDS-PAGE電泳和Western blot分析。

具體內容:

服務步驟

具體內容

交付內容

交付時間

目標基因亞克隆 (可選)

1.擴增并抽提含有目的基因的載體質粒。

   2.將目的基因亞克隆到合適的表達質粒。包括IPTG,阿拉伯糖,熱休克,冷休克誘導方式,GSTStrepMBPHisHAFlagmyc等融合標簽載體的構建。

3.測序驗證構建質粒的準確性。

正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。

2-3

E. coli表達菌株轉化及篩選

1.擴增并抽提構建好的表達質粒。

2.將表達質粒轉化到高效的E. coli表達菌株中。

3.至少挑選3個陽性克隆于LB培養基中擴增并選擇合適的條件,SDS-PAGE 檢測蛋白表達情況,篩選出合適菌株。

重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。

2-3

目的蛋白的誘導表達及純化

1.對蛋白表達時間,溫度以及IPTG濃度等表達條件進行優化,并誘導表達目的蛋白。

2.搖瓶培養1L重組細菌,通過親和層析,離子交換,疏水及凝膠過濾等方法純化表達的重組蛋白。

3.可根據需求利用蛋白酶去除不需要的純化標簽(可選,注:構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點),再純化獲得所需的目的蛋白。

4..SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

≥1mg純化好的目的蛋白及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽或去除純化標簽的目的蛋白,純度最高可達95%以上。

2-3

包涵體復性

蛋白誘導表達與包涵體純化
數百種緩沖條件快速篩選最佳復性緩沖,采用稀釋復性,透析復性,柱層析復性等多種技術獲得純度大于90%的包涵體。

大于1mg目的蛋白

2-3

中試工藝研究

5~30L高密度發酵,大規模純化,凍干,對外服務。

能夠完全重復的中試放大工藝。

協商


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